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DNase I, RNase-Free

简要描述:

不含RNA酶的DNA酶I(核酸内切酶),能够降解双链和单链DNA,产生3´-羟基核苷酸,不含RNA酶的DNA酶可以在需要维持RNA完整性时使用。DNA酶可以用于切口平移实验,获得随机核酸片段,足迹法中去除基因组DNA的干扰,在体外转录时去除DNA模板,或者是在RT-PCR反应之前去除RNA中的DNA污染。

产品介绍

在Mg2+存在的条件下,DNA酶对DNA的每条链都起作用,DNA酶的作用位点具有随机性。在Mn2+存在的条件下,DNase IDNA的两条链上的*位置切割,从而产生1-2个核苷酸长度的平末端或突出末端。

该产品不包含RNA酶抑制剂,在使用时,需注意RNA酶的污染。

在不同的缓冲体系下,降解一定质量的DNA所需的酶量可能有所不同,例如,在盐浓度大于100 mM时会抑制DNA酶的活性。

10×反应缓冲液是由400mM Tris-HCl (pH 8.0),100mM MgSO4以及10mM CaCl2组成。

酶储存缓冲液: DNase 的储存缓冲液为 10mM HEPES (pH 7.5),50% glycerol (v/v), 10mM CaCl2和 10mM MgCl2。

热失活: 在含有终止缓冲液的条件下 65 ℃反 应 10 min。

抑制剂: EGTA; EDTA; 盐浓度>100mM 将 会抑制 DNA 酶的活性。

分子量: 31,000 kDa

必要条件: Ca 2 及 Mg 2 或 Mn 2 。

来源: 牛胰腺

终止缓冲液: 20mM EGTA (pH 8.0)。

酶活性单位的定义: DNA 酶的单位活性是在 50 uL 40mM Tris-HCl (pH 7.9),10mM NaCl, 6mM MgCl2 和 10mM CaCl2组成的缓 冲液中 37 ℃,10 min 降解 1ug lambda DNA 所需的酶量。在这些条件下,1 个单位的 DNA 酶活性和 1 个 Kunitz 单位近似相同。

使用建议

该产品不包含 RNA 酶抑制剂,在使用 时,需注意 RNA 酶的污染。 在不同的缓冲体系下,降解一定质量的 DNA 所需的酶量可能有所不同,例如,在盐 浓度大于 100 mM 时会抑制 DNA 酶的活性。

质量控制

RNA 酶测定: 为了检测 RNA 酶的活性,将 50ng [ 3 H]RNA 与 5 个单位的不含 RNA 酶的 DNA 酶在 37℃,转录缓冲液中孵育 1 个小 时,通过闪烁计数检测产生的放射性标记的 核苷酸。

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